Количественное определение пировиноградной кислоты в моче
Принцип метода. Пировиноградная кислота является одним из промежуточных продуктов углеводного обмена. Пировиноградная кислота взаимодействует с 2,4-динитрофенилгидразином в щелочной среде, образуя 2,4-динитрофенилгидразоны пировиноградной кислоты желто-оранжевого цвета, интенсивность окрашивания которых пропорциональна концентрации пировиноградной кислоты.
Гидразоны α-кетоглутаровой, щавелевоуксусной, дегидроаскорбиновой кислот в щелочной среде нестойки и быстро разлагаются.
Ход работы.Контрольная и опытнаяпробы ставятся одновременно, пользуются сухой химпосудой. Берут 2 пробирки: в контрольную наливают 1мл воды в опытную 1 мл мочи. Зачем в обе пробирки приливают по 1 мл 2,5% спиртового раствора КОН, перемешивают в течение 1 минуты, а затем приливают по 0,5мл 0,1 % раствора 2,4-динитрофенилгидразина и оставляют стоять на 15 минут при комнатной температуре. Колориметрируют на ФЭК против контроля на реактивы (проба с водой) в кювете толщиной 5мм с синим светофильтром. Расчеты выполняют по калибровочному графику, при этом находим содержание ПВК в моче в мкг/мл. Найденную величину умножаем на суточный диурез (1500 мл для мужчин и 1200 мл для женщин) и получаем содержание ПВК в суточной моче. В норме экскреция ПВК с мочой составляет 10-25 мг в сутки (113,7-283,9 мкммоль/сут).
Увеличение выделения ПВК с мочой наблюдается при авитаминозе и гиповитаминозе В1. Содержание ПВК в крови и экскреция с мочой возрастает также при сахарном диабете, сердечной недостаточности, гиперфункции гипофизарно—адреналовой системы. При наркозе содержание ПВК в крови, напротив, снижается.
Количественное определение глюкозы в крови
Глюкозооксидазным методом.
Принцип метода. Глюкоза в присутствии фермента глюкозооксидазы окисляется кислородом воздуха с образованием перекиси водорода, при разрушении которой под влиянием пероксидазы происходит конденсация фенола и p-аминоантипирина в окрашенное соединение. Реакция протекает по схеме:
2Н2О2 + фенол + 4-аминоантипирин ¾¾¾¾¾® 4(n-бензохинонмоно-имино)- феназон + 4Н2О
(n-аминофеназон) (цветной хиноимин)
Интенсивность окраски раствора пропорциональна концентрации глюкозы в крови.
Ход определения. Определение проводят по схеме табл. 25.
Таблица 25
Отмерить, мл | Опыт | Стандарт | Контрольная проба |
Сыворотка крови | 0,02 | — | — |
Стандартный раствор глюкозы | — | 0,02 | — |
Дистиллированная вода | — | — | 0,02 |
Реактив для определения глюкозы | 3,0 | 3,0 | 3,0 |
Пробы перемешивают и инкубируют 30 мин. при 37 о С. Измеряют оптическую плотность опытной (Е1) и стандартной пробы (Е2) против контрольной пробы при длине волны 480-520 нм в кювете 0,5 см.
Расчёт произвести по формуле: С глюкозы (моль/л)= Е1/Е2×10. В норме содержание глюкозы в крови составляет 3,33-5,55 мМоль или 0,6-1,0 г/л. Гипергликемия наблюдается после приема пищи, содержащей большое количество сахара (алиментарная гипергликемия), а также при клинически выраженной форме сахарного диабета. Гипогликемия наблюдается после инъекций инсулина и при некоторых формах гликогенозов.
Работа 2. Определение глюкозы в крови по цветной реакции
С орто-толуидином.
Принцип метода.Белки крови осаждаются трихлоруксусной кислотой и отделяются центрифугированием. Центрифугат обрабатывается орто-толуидиновым реактивом.
Глюкоза при нагревании с о-толуидином в кислой среде дает зеленое окрашивание, интенсивность которого прямо пропорциональна концентрации глюкозы в крови и определяется колориметрически на ФЭКе.
Ход определения.В центрифужную пробирку налить 0,9 мл 3% раствора трихлоруксусной кислоты и выдуть на стенку пробирки 0,1 мл крови, взятой из пальца. Содержимое пробирки взболтать и центрифугировать 5-7 мин. при 1500 об/мин.
Взять две пробирки. В первую (опыт) прилить 0,5 мл центрифугата, во вторую (контроль) — 0,5 мл 3% раствора трихлоруксусной кислоты и в обе пробирки добавить по 4,5 мл о-толуидинового реактива. Пробирки поместить на 8 мин. (точно!) в кипящую водяную баню и сразу охладить под водопроводной водой до комнатной температуры.
Опытную пробу колориметрировать против контроля или дистиллированной воды на ФЭКе в кювете толщиной слоя 10 мм при красном (600-650 нм) или желтом (595 нм) светофильтре.
Расчет произвести по калибровочному графику или с применением стандартного раствора глюкозы.
Стандартная проба. Стандартную пробу проводят как опытную, но вместо крови используют стандартный раствор глюкозы с концентрацией 5,55 мМ (1,0 г/л), а в случае высокого содержания сахара в крови 16,65 мМ (3,0 г/л) или 27,75 мМ (5,0 г/л).
Расчет произвести по формуле:
Соп : = (Ссг х Еоп) / Ест = мМоль глюкозы или г/л глюкозы, где
Соп — концентрация глюкозы в опытной пробе,
Сст — концентрация глюкозы в стандартной пробе в мМ или г/л,
Еоп — оптическая плотность опытной пробы,
Ест — оптическая плотность стандартного раствора глюкозы.
В норме содержание глюкозы в крови составляет 3,33-5,55 мМоль или 0,6-1,0 г/л. Гипергликемия наблюдается после приема пищи, содержащей большое количество сахара (алиментарная гипергликемия), а также при клинически выраженной форме сахарного диабета. Гипогликемия наблюдается после инъекций инсулина и при некоторых формах гликогенозов.
Определение пвк в моче уравнение
Определение концентрации органических кислот в моче, используемое для диагностики врождённых органических ацидемий (ацидурий).
Гликолиевая кислота • Глутаровая кислота • Пировиноградная кислота • Адипиновая кислота • Гиппуровая кислота • 3-гидроксимасляная кислота • 3-гидрокси-3-метилглутаровая кислота • 4-гидроксифенилпировиноградная кислота • 4-гидроксифенилуксусная кислота • Метилмалоновая кислота • Глиоксиловая кислота • Этилмалоновая кислота • 2-гидроксиизокапроновая кислота • Мевалоновая кислота • Фенилпировиноградная кислота • Субериновая кислота • 2-этил-3-гидроксимасляная кислота • 3-метилглутаровая кислота • Себациновая кислота • Сукциновая кислота • Гомогентизиновая кислота • N-ацетиласпартиковая кислота • Глицериновая кислота
Диагностика органических ацидемий (ацидурий).
Organic acids, Urine.
Газовая хроматография-масс-спектрометрия (ГХ-МС).
Ммоль/моль креат. (миллимоль на моль креатинина).
Какой биоматериал можно использовать для исследования?
Среднюю порцию утренней мочи
Как правильно подготовиться к исследованию?
- Исключить из рациона алкоголь в течение 24 часов до исследования.
- Исключить прием мочегонных препаратов в течение 48 часов до сбора мочи (по согласованию с врачом).
Общая информация об исследовании
Органические кислоты – это органические вещества, которые обладают свойствами кислот. Они образуются под действием ферментов в результате метаболизма белков, углеводов и жиров и различаются по структуре и составу. При нарушении функции этих ферментов органические кислоты накапливаются в крови и в тканях. Чаще нарушение функции ферментов носит врождённый характер. В этом случае говорят о врождённых органических ацидемиях (ацидуриях). Существует огромное количество органических кислот и, следовательно, многообразие врождённых ацидемий. Наиболее часто встречаются метилмалоновая, пропионовая и изовалериановая ацидемии, однако существуют и другие, более редкие варианты.
Врождённые ацидемии имеют много общего. Так, большинство врождённых ацидемий – это аутосомно-рециссивные заболевания, которые проявляются в младенчестве или в раннем детстве. Вне зависимости от природы органической кислоты, ее избыток оказывает отрицательное воздействие на головной мозг. Это объясняет, почему наиболее часто врождённые ацидемии проявляются в виде нарушений со стороны нервной системы: задержки умственного развития, судорог, гипо/гипертонуса или дистонии, атаксии, энцефалопатии, задержки речевого развития, нарушений зрения, экстрапирамидных симптомов и других. К другим признакам врождённых ацидемий относятся метаболический ацидоз, гипогликемия, тошнота/рвота, кожные высыпания, гепатомегалия, кетоацидоз или кетонурия и признаки дисморфогенеза. Главная опасность врождённых ацидемий состоит в том, что при их несвоевременной коррекции эти изменения необратимы, поэтому так важна ранняя диагностика и лечение заболеваний этой группы. Основа диагностики врождённых ацидемий – это лабораторные анализы. Так как все органические ацидемии похожи друг на друга, для их диагностики проводят комплексный анализ, в котором определяют концентрацию сразу всех органических кислот.
Лабораторная диагностика ацидемий не очень проста. Это связано с тем, что в крови одновременно содержится огромное количество органических кислот, при этом транзиторное повышение их концентрации может наблюдаться в результате приема лекарственных средств, изменений в диете или даже в составе микрофлоры кишечника. Одним из лучших методов диагностики врождённых ацидемий является газовая хроматография-масс-спектрометрия. Этот метод позволяет быстро разделить кислоты между собой и определить природу органической кислоты.
Анализ на органические кислоты проводят при наличии у ребенка: 1. Специфического, странного запаха мочи. 2. Метаболического ацидоза, транзиторного или постоянного, при повышенном или нормальном анионном интервале. 3. Упорной рвоты, особенно если при этом наблюдается метаболический ацидоз. 4. Острого заболевания в младенческом возрасте, особенно если при этом наблюдается гипераммониемия и метаболический ацидоз. 5. Прогрессирующих экстрапирамидных симптомов. 6. Синдрома Рея, особенно при возникновении в младенчестве, при наличии повторных приступов и отягощенного наследственного анамнеза по этому заболеванию. 7. Любого наследственного заболевания с неустановленной причиной. Учитывая необратимые последствия, к которым могут привести органические ацидемии, в некоторых странах и семьях предпочитают проводить профилактический (скрининговый) анализ на органические кислоты всем новорождённым детям.
Для диагностики врождённых ацидемий можно использовать как кровь, так и мочу. Следует отметить, что органические кислоты практически не реабсорбируются в почечных канальцах, поэтому их концентрация в моче выше, чем в крови, и их проще определить в моче. Анализ обеих биологических жидкостей (крови и мочи) позволяют получить более точный результат.
Метод определения органических кислот с помощью газовой хроматографии-масс-спектрометрии – один из наиболее точных методов, однако ложноположительные и ложноотрицательные результаты анализа все же возможны. Поэтому результаты теста следует интерпретировать с учетом всех анамнестических, клинических и других лабораторных данных.
Для чего используется исследование?
- Для диагностики врождённых органических ацидемий (ацидурий).
Когда назначается исследование?
- специфического, странного запаха мочи;
- метаболического ацидоза, транзиторного или постоянного, при повышенном или нормальном анионном интервале;
- упорной рвоты, особенно если при этом наблюдается метаболический ацидоз;
- острого заболевания в младенческом возрасте, особенно если при этом наблюдается гипераммониемия и метаболический ацидоз;
- прогрессирующих экстрапирамидных симптомов;
- синдрома Рея, особенно при возникновении в младенчестве, при наличии повторных приступов и отягощенного наследственного анамнеза по этому заболеванию;
- любого наследственного заболевания с неустановленной причиной;
- при профилактическом (скрининговом) обследовании новорождённого.
- Результаты теста следует интерпретировать с учетом всех анамнестических, клинических и других лабораторных данных;
- для получения точного результата необходимо следовать рекомендациям по подготовке к тесту.
214 Расширенный анализ мочи на органические кислоты (60 показателей) — взрослые и дети старше 3 лет
Кто назначает исследование?
- Narayanan MP, Kannan V, Vinayan KP, Vasudevan DM. Diagnosis of major organic acidurias in children: two years experience at a tertiary care centre. Indian J Clin Biochem. 2011 Oct;26(4):347-53. Epub 2011 Feb 1.
- Goodman SI. An introduction to gas chromatography-mass spectrometry and the inherited organic acidemias. Am J Hum Genet. 1980 Nov;32(6):781-92.
Мочевая кислота в крови и моче – норма, отклонения, лечение гиперурикемии
Мочевая кислота. Лицензия: Envato Elements Item
» data-medium-file=»https://unclinic.ru/wp-content/uploads/2021/12/mochevaja-kislota-900×600.jpg» data-large-file=»https://unclinic.ru/wp-content/uploads/2021/12/mochevaja-kislota.jpg» title=»Мочевая кислота в крови и моче – норма, отклонения, лечение гиперурикемии»>
Алена Герасимова (Dalles) Разработчик сайта, редактор
- Запись опубликована: 27.12.2021
- Время чтения: 1 mins read
Мочевая кислота — результат трансформации азотистых оснований, в основном выводимый с мочой. Ее концентрация зависит от разницы между количеством, вырабатываемым в организме и выводимым почками. Лишняя мочевая кислота (гиперурикемия) откладывается в виде кристаллов, давая серьезные симптомы.
Анализ на мочевую кислоту в крови или в моче обычно выполняется при симптомах подагры и заболеваний почек. Многих больных, получивших негативный результат, беспокоит вопрос о том, как убрать излишки мочевой кислоты, тем самым уменьшив боль, сопровождающую гиперурикемию.
Что такое мочевая кислота? Откуда она берется в организме?
Мочевая кислота — это конечный и естественный продукт метаболизма пуринов — элемента нуклеиновых кислот (ДНК и РНК) клеток всех организмов. Источники азотистых оснований — внутренний синтез этих соединений и физиологический распад клеток. Некоторые пурины также попадают в организм с продуктами: пивом, красным мясом, копченой рыбой, какао.
Пурины благодаря ферментам деградируют в гепатоцитах печени. Это означает, что конечный продукт их распада должен выводиться, так как больше ни во что не преобразуется. Примерно 70% мочевой кислоты выводится с мочой, фильтруемой через почки, остальное, при участии пищеварительной системы, с калом.
Выведение моч. к-ты затрудняется, например, в случае мочекаменной болезни или подагры. Также это вещество накапливается в больших количествах в крови, в ходе некоторых метаболических заболеваний.
Когда назначаются анализы?
Измерить уровень мочевой кислоты нужно в ряде случаев:
- Подозрение на подагру. Ее симптомы: болезненность, покраснение и отек суставов, особенно воспаление основания сустава большого пальца ноги. Подагра часто вызывает воспаление суставов, особенно первого плюснефалангового сустава.
- Диагностика мочекаменной болезни . Патология связана с выведением большого количества мочевой кислоты. В случае тяжелой почечной колики анализ помогает определить тип мочевых камней у больного. Почечная колика характеризуется сильной болью внизу живота, иррадиирующей вплоть до спины. Также у больных отмечается выраженное уменьшение выделяемой мочи, гематурия или изменение цвета мочи.
- Почечная недостаточность .
- Гестоз у беременных .
Дополнительные (неспецифические) симптомы при повышении мочевой кислоты:
- боль и жжение в области мочевого пузыря;
- Увеличение количества мочи;
- лихорадка;
- боль в животе и поясничной области;
- тошнота и рвота.
Обследование также должно проводиться среди онкологических больных, проходящих химиотерапию и лучевую терапию. Химиотерапия ускоряет разрушение раковых клеток с высвобождением из них пуриновых соединений, впоследствии превращающихся в мочевую кислоту. Также анализы назначаются для контроля за ходом лечения у больных подагрой.
Определение мочевой кислоты в крови и моче. Как подготовиться к исследованию?
Уровень мочевой кислоты может определяться в моче и в сыворотке крови. В случае определения сыворотки венозная кровь берется натощак: желательно выждать 12 часов с момента приема пищи. Важно понимать, что употребление продуктов, богатых пуринами, может фальсифицировать результат, поэтому за двое суток нужно исключить такие продукты из меню.
При подготовке к обследованию нужно избегать физических нагрузок 2-3 дня до анализа. Также нужно ограничить стрессовые факторы. Риск повреждения клеток и временного повышения концентрации мочевой кислоты в крови должен быть сведен к минимуму.
Во время сбора мочи следует придерживаться тех же рекомендаций, что и при подготовке к сывороточному тесту.
Как делают анализ
Измерение концентрации мочевой кислоты заключается в единовременном сборе крови из локтевой вены, с помощью одноразовой иглы и пробирки. Методика проведения теста — спектрофотометрия (колориметрический иммуноферментный метод).
Концентрацию МК в моче можно определить как в одном образце, так и в суточном сборе мочи. Второй метод заключается в сборе всех образцов мочи, сданных в течение 24 часов, в один стерильный сосуд. Затем нужно измерить объем мочи и взять из нее образец, предназначенный для исследования в лаборатории.
Мочевая кислота – нормы для женщин, мужчин и детей
Уровень мочевой кислоты зависит от пола, а дополнительно увеличивается с возрастом, примерно до 70 лет. Анализ результатов испытаний всегда должен основываться на референсных значениях лаборатории, в которой они были выполнены, и находящихся в пределах заданных диапазонов стандартов.
Таблица 1. Средние нормы мочевой кислоты в сыворотке крови (Европа)
Пол, возраст | Норма мочевой кислоты |
Мужчины | 300-360 мкмоль/л (5-6 мг/дл) |
Женщины | 240-300 мкмоль/л (4-5 мг/дл) |
Дети | 210-240 мкмоль/л (3,5-4 мг/дл) |
Гиперурикемия диагностируется после нескольких определений концентраций выше 420 мкмоль/л (>7 мг/дл). Среднее выведение мочевой кислоты с мочой составляет около 400-650 мг/сут. Верхний предел обычно составляет 800 мг / день (4,8 ммоль / 24 часа).
Приступ подагры может быть у больного с нормальным уровнем мочевой кислоты и наоборот – повышенный уровень мочевой кислоты не всегда дает симптомы подагры. Наиболее частая причина подагры: генетическая склонность к избыточной выработке мочевой кислоты и нарушение выделительной функции почек. Поэтому, перед тестом расскажите врачу о прошлых заболеваниях и о лекарствах, которые вы принимаете.
Низкий и высокий уровень мочевой кислоты — чем это опасно?
Высокий и низкий уровень мочевой кислоты влияет на правильное функционирование организма. МК обладает противоположными эффектами:
- С одной стороны это ненужный продукт метаболических изменений. Поэтому повышение ее концентрации опасно для здоровья. Гиперурикемия приводит к подагре, нефролитиазу и другим заболеваниям почек. Также у людей с повышенной мочевой кислотой часто диагностируются гипотиреоз, гемолитическая анемия и сердечно-сосудистые заболевания, в том числе инфаркт, что говорит о связи этих факторов.
- С другой — мочевая кислота обладает антиоксидантным действием, защищая организм от свободных радикалов и вызванных ими повреждений клеток. Ее дефицит, например, увеличивает риск развития деменции, болезни Паркинсона.
Нельзя самостоятельно интерпретировать результаты анализов. Результат определения мочевой кислоты часто трактуется как вспомогательный к комплексной диагностике.
Расшифровка анализа: высокий уровень мочевой кислоты
Гиперурикемия может быть связана с чрезмерной выработкой МК или ее высвобождением из клеток, например:
- при генетических заболеваниях (болезнь Леша-Нихана, болезнь фон Гирке);
- из-за разрушения клеток в процессе лечения рака, при лучевой терапии или химиотерапии;
- из-за отравления свинцом;
- в случае лейкоза;
- в постменопаузальном периоде.
Гиперурикемия также возникает у людей с больными почками при ацидозе или злоупотреблении алкоголем. Также может повлиять диета с большим количеством белка и физические перегрузки. Ещё повышает уровень мочевой кислоты прием барбитуратов и диуретиков.
Наиболее распространенные симптомы гиперурикемии:
- Почечная колика . Больной чувствует сильную поясничную боль, иррадиирующую в сторону и в нижнюю конечность. Она имеет тенденцию смещаться. Часто боль сопровождается слабостью, лихорадкой и тошнотой;
- Подагра. Сопровождается лихорадкой и слабостью. Это следствие отложения кристаллов моч. к-ты в суставах, в результате чего возникает воспаление суставов.
Расшифровка анализа: низкий уровень мочевой кислоты
Концентрация МК в крови может быть снижена. Однако это не указывает на конкретное заболевание, а скорее возникает как сопутствующий симптом. Снижение может происходить при:
- Болезни Вильсона;
- синдроме Фанкони;
- заболеваниях, связанных с избыточной секрецией гормона роста;
- Синдроме Шварца-Барттера.
Слишком низкий уровень мочевой кислоты также может указывать на продолжающееся воспаление в почках и печени, целиакию, лимфомы и другие виды рака.
Снижают концентрацию препараты, применяемые для лечения гиперурикемии: салицилаты, аллопуринол, пробенецид, эстрогены, кортикотропин, фенотиазины.
Как снизить мочевую кислоту?
Основа лечения гиперурикемии — излечение основного заболевания, так как избыток моч. к-ты может быть результатом врожденных генетических состояний, результатом ожирения, неправильного питания, диабета или обезвоживания.
Чтобы очистить организм от избытка кристаллов мочевой кислоты, нужно увеличить физическую активность и следовать принципам рационального питания.
Диета больных с высоким уровнем мочевой кислоты основывается в первую очередь на употреблении негазированной воды и отказе от крепкого кофе, чая и пива. Также повышают мочевую кислоту в крови напитки, содержащие фруктозу и фруктовые соки. Второй принцип — ограничение пуринов. Это диета, бедная рыбой, красным мясом, бобовыми, грибами.
Количество соли в блюдах следует ограничить, так как избыток натрия тормозит выведение мочевой кислоты с мочой.
Нужно есть больше постного мяса птицы, фруктов и зерновых. Очень хороший эффект дают настои, приготовленные из листьев березы, одуванчика и крапивы.
Назначается фармакотерапия, понижающая мочевую кислоту в крови. Наиболее распространенные лекарства: фебуксостат и аллопуринол. Помимо приема лекарств нужно бросить курить.
Точные рекомендации всегда должны быть согласованы с лечащим врачом (например, урологом, ревматологом), который также принимает решение о необходимости возможной фармакотерапии.
Похожее
Вы должны авторизоваться чтобы опубликовать комментарий.
http://helix.ru/kb/item/06-193
http://unclinic.ru/mochevaja-kislota-v-krovi-i-moche-norma-otklonenija-lechenie-giperurikemii/